📝 MTT assay 결과 정리, 엑셀 부터 PRISM까지 완벽 가이드! - 엑셀편

 

 

안녕하세요 ꔛ ෆ˙ᵕ˙ෆ

 

세포 생존율 측정의 핵심! Tetrazolium assay (MTT, MTS, WST assay) 실험, 다들 해보셨죠?

 

다른 실험 결과 정리도 중요하지만, 특히 tetrazolium assay (MTT, MTS, WST assay) 실험은 약물 농도 선정, 세포 독성 시험 등 과제 진행에 있어서 아주 중요한 역할을 하는데요! 

그렇기 때문에 IC50값을 구해서 실험에 대해 기준치를 잡기도 하죠ꔛ

 

하지만 실험 후 데이터 정리, 특히 Raw data부터 결과 그래프까지 깔끔하게 정리하는 건 생각보다 쉽지 않다고 느끼시는 분들도 계실텐데요!

오늘은 MTT assay 결과를 엑셀과 PRISM을 활용하여 완벽하게 정리하는 방법에 대해

소개해드리고자 합니다.

 

같이 따라하다보면 금방 감을 익힐 수 있을꺼예요✨

 

빨간색으로 표기된 부분은 실험에 따라 수정되는 부분이고, 검은색 글씨는 고정입니다!

(참고용이라는 점 알아주세요!)

 

+ 제가 사용하는 엑셀 방식으로 정리하면 PRISM으로 바로 적용해서 값을 구하실 수 있어요ꔛ

 

📝 엑셀 파일 (raw data 정리) ★★★★★

 

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Cell viability 엑셀 정리

 

• 실험 내용: 진행한 실험에 대한 간략한 설명

 ex) 폐암 세포주에서 Erlotinib 처리에 따른 세포 독성 확인 / 폐암 세포주에서 Olaparib IC 50에 따른 저항성 및 민감성 세포주 구분 등

 

• 실험 조건: 진행한 실험 조건에 대한 기입

 ex) 폐암 세포주에서 Erlotinib 처리에 따른 세포 독성 확인 / 폐암 세포주에서 Olaparib IC 50에 따른 저항성 및 민감성 세포주 구분 등

☝️ Tips (cell seeding, drug, test compound, absorbace)

 👩🏻‍🎓cell seeding은 꼭 기입해주세요! 추후 실험 discussion에서 논의가 될 수 있어요ꔛ

     약물 처리군보다 대조군 (cell only)의 흡광도가 낮다면, 경험상 크게 2가지인데요

      1. cell이 overgrowth 되는 경우  2. cell이 뭉쳐서 seeding 되는 경우 

       두 경우 모두, cell 이 뜨기때문에 나중에 formazan이 거의 없는 경우가 더러 있어요

 👩🏻‍🎓 같은 약물이여도 제조사에 따라 결과값이 달라지는 경우가 종종 있더라구요!

      그렇기때문에 사용한 시약에 대한 제조사 및 cat.no 기입은 해주시는 것을 좋아요

 👩🏻‍🎓흡광도에 따라 결과값이 달라지기 때문에 조건을 최대한 자세히 적어두는 것이 좋아요ꔛ

• 실험 결과 ①: Raw data (가공하지 않은 원본 데이터상태)

 각 약물에 대한 흡광도 및 MTT only 흡광도를 기입해주세요!

 

 

• 실험 결과 ②: Raw data 흡광도 - MTT only 흡광도, % 값 및 오차 범위 구하기/꺾은선 그래프 (결과)

☝️ Tips

 👩🏻‍🎓 이 부분부터는 엑셀의 함수를 이용하는데요! 

    raw data 흡광도에서 backgroud 값을 빼주시면 됩니다ꔛ

 👩🏻‍🎓약물을 처리하지않은 군을 control로 각 농도의 흡광도를 나눠준 후 x 100을 해주면 %값이

     나옵니다.  → (시험 농도 흡광도 / control 흡광도) x 100 = %흡광도

 👩🏻‍🎓%흡광도 구한 뒤, 꺾은선 그래프로 정리를 하였는데요-! 

     해당 실험에 대한 결과 해석은 A549 세포주에 erlotinib을 농도별로 72시간 처리하였을 때의 흡광도로, IC50값은 12.5 μM-25 μM 임을 예상할 수 있다라고 해석할 수 있겠죠?

 

이 실험 방법의 경우, 엑셀 정리/프리즘 두 가지 방법을 이용해서 정리할 수 있는데요!

프리즘으로 정리하는 방법에 대해서도 소개해 드릴께요 ꔛ ෆ˙ᵕ˙ෆ